一种尿激酶吸附剂及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111760556A(43)申请公布日2020.10.13(21)申请号202010656257.8(22)申请日2020.07.09(71)申请人江苏尤里卡生物科技有限公司地址211200江苏省南京市溧水开发区中兴东路22号(72)发明人顾京李争刘艳红丁晶黄俊杰熊心磊(74)专利代理机构北京精金石知识产权代理有限公司11470代理人尉月丽(51)Int.Cl.B01J20/22(2006.01)B01J20/30(2006.01)C12N9/72(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种尿激酶吸附剂及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种尿激酶吸附剂及其制备方法和应用，所述制备方法包括S1、将硅胶高温活化，得到活化硅胶；S2、将步骤S1得到的活化硅胶和偶联剂在有机溶剂中反应，过滤、乙醇提取、水洗，得到前驱体1；S3、步骤S2得到的前躯体1与溴素反应，过滤水洗，得到前躯体2；S4、向步骤S3得到的前躯体2中加入水和对氨基苯甲脒盐酸盐，调节pH，反应，降温、过滤、乙醇提取、水洗、甩干，即得；上述方法制备的尿激酶吸附剂以及利用上述尿激酶吸附剂从人尿中直接吸附尿激酶的方法。本发明制备的尿激酶吸附剂的特异性更强，适用范围广，成本低，可直接从人尿中吸附尿激酶，且尿激酶的粗提收率高，比活高，可以实现尿激酶粗品的大规模生产。CN111760556ACN111760556A权利要求书1/1页1.一种尿激酶吸附剂的制备方法：其特征在于，包括以下步骤：S1、将硅胶高温活化，得到活化硅胶；S2、将步骤S1得到的活化硅胶和偶联剂在有机溶剂中反应，过滤、乙醇提取、水洗，得到前驱体1；S3、步骤S2得到的前躯体1与溴素反应，过滤水洗，得到前躯体2；S4、向步骤S3得到的前躯体2中加入水和对氨基苯甲脒盐酸盐，调节pH，反应，降温、过滤、乙醇提取、水洗、甩干，即得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述高温活化为：在120-160℃下烘干3-10h。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述偶联剂为乙烯基硅烷偶联剂。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述有机溶剂为甲苯、甲醇、乙醇和异丙醇中的至少一种。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中活化硅胶、偶联剂和有机溶剂的用量比例为100g：(45-55)ml：(350-450)ml。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述对氨基苯甲脒盐酸盐的加入量为步骤S2中所述活化硅胶用量的1/10-3/10。7.一种根据权利要求1-6任一项所述的制备方法制备的尿激酶吸附剂。8.一种从人尿中直接吸附尿激酶的方法，其特征在于，利用权利要求1-6任一项所述的制备方法制备的尿激酶吸附剂进行吸附。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将尿激酶吸附剂悬液注入带滤网的吸附柱，打开吸附柱的出水口，水流出吸附柱，尿激酶吸附剂形成吸附柱床；(2)将步骤(1)得到的吸附柱放置于小便池/斗中，吸附人尿中的尿激酶，取回吸附柱床；(3)将步骤(2)取回的吸附床柱用纯化水清洗，取出吸附剂；(4)向步骤(3)得到的吸附剂加入平衡缓冲液，制成悬混液；(5)将步骤(4)得到的悬混液装入层析柱，用洗脱缓冲液进行洗脱，收集到的洗脱液，即为尿激酶粗品溶液；(6)将步骤(5)洗脱结束后的层析柱用再生缓冲液清洗，用纯化水冲洗至中性，取出尿激酶吸附剂。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述尿激酶吸附剂悬液中尿激酶吸附剂的质量分数为48-55％；步骤(4)中所述平衡缓冲液：pH6.4-7.8，含0.15-0.65MNaCl的0.05-0.15M的Tris-HCl缓冲液；步骤(5)中所述洗脱缓冲液：pH2.0-3.0，0.05M-0.15M甘氨酸缓冲液；步骤(6)中所述再生缓冲液为含0.1-0.2M醋酸的体积百分数为10-30％的乙醇水溶液。2CN111760556A说明书1/5页一种尿激酶吸附剂及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于医学生物技术领域，具体涉及一种可直接从人尿中吸附尿激酶的吸附剂及其制备方法和应用。背景技术[0002]尿激酶是由人肾小管上皮细胞产生的一种丝氨酸蛋白酶，是一种碱性蛋白，等电点在pH8.7左右。为白色非结晶状粉末，易溶于水。稀溶液性状不稳定，必须新鲜配用，且不得用酸性溶液稀释。冻干状态可稳定数年。尿激酶是专一性很强的蛋白水解酶。对合成底物的活性与胰蛋白酶和纤溶酶近似,也有酯酶的活力。无抗原性，不使体内产生抗体。体内半衰期为(14±6)min。[0003]尿激酶是一种溶血栓药物，它能激活纤溶酶原