一种雷帕霉素的纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111995631A(43)申请公布日2020.11.27(21)申请号202010672728.4(22)申请日2020.07.14(71)申请人山东省药学科学院地址250101山东省济南市高新区新泺大街989号(72)发明人刘飞张晓元张艳艳郝荣华陈勉张林军张金华袁超张秀华袁丹丹刘霞凌沛学(74)专利代理机构北京嘉科知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11687代理人杨波(51)Int.Cl.C07D498/18(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称一种雷帕霉素的纯化方法(57)摘要本发明属于生物技术领域，尤其涉及雷帕霉素的纯化方法，该方法包括：在第一温度下，用第一有机溶剂对雷帕霉素发酵液进行抽提后，过滤得到滤液；将活性炭加入滤液中，得到第一中间产物；用第二有机溶剂水溶液洗脱所述第一中间产物的吸附杂质，得到第二中间产物；用第三有机溶剂循环洗脱所述第二中间产物，浓缩洗脱液，得到浓缩液；将所述浓缩液经高效逆流色谱分离后，得到纯化的雷帕霉素。此方法通过活性炭吸附/解吸附‑高效逆流色谱分离雷帕霉素，具有工艺操作性强，产品纯度高，收率高，适合在工业规模上生产等优点。CN111995631ACN111995631A权利要求书1/1页1.一种雷帕霉素的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括：在第一温度下，用第一有机溶剂对雷帕霉素发酵液进行抽提后，过滤得到滤液；将活性炭加入滤液中，得到第一中间产物；用第二有机溶剂水溶液洗脱所述第一中间产物的吸附杂质，得到第二中间产物；用第三有机溶剂循环洗脱所述第二中间产物，浓缩洗脱液，得到浓缩液；将所述浓缩液经高效逆流色谱分离后，得到纯化的雷帕霉素。2.如权利要求1所述的雷帕霉素的纯化方法，其特征在于，所述第一温度为35-42℃。3.如权利要求1所述的雷帕霉素的纯化方法，其特征在于，所述第一溶剂为乙醇或丙酮；和/或，所述第二溶剂包括乙酸乙酯、无水甲醇、乙腈和丙酮中的至少一种；和/或，所述第三溶剂包括乙酸乙酯、无水甲醇、乙腈和丙酮中的至少一种。4.如权利要求1所述的雷帕霉素的纯化方法，其特征在于，所述在第一温度下，用第一有机溶剂对雷帕霉素发酵液进行抽提后，过滤得到滤液步骤中，抽提时间为2-4小时。5.如权利要求1所述的雷帕霉素的纯化方法，其特征在于，所述雷帕霉素发酵液体积与所述第一有机溶剂的体积比为1:1-1:2。6.如权利要求1所述的雷帕霉素的纯化方法，其特征在于，所述活性炭与所述第二有机溶剂的体积比为1:4.5-1:5.5；和/或，所述活性炭与所述第三有机溶剂的体积比为1:1.5-1:2.5。7.如权利要求1所述的雷帕霉素的纯化方法，其特征在于，所述将活性炭加入滤液中，得到第一中间产物步骤包括：将活性炭加入滤液中，搅拌吸附后，过过滤器得到第一中间产物，所述第一中间产物为活性炭滤饼。8.如权利要求7所述的雷帕霉素的纯化方法，其特征在于，所述将所述滤液过活性炭，得到第一中间产物步骤中，所述活性炭的质量与所述滤液的体积比为1:50-1:100g/mL。9.如权利要求7所述的雷帕霉素的纯化方法，其特征在于，所述将所述滤液过活性炭，得到第一中间产物步骤中，搅拌吸附的时间为1-5小时。10.如权利要求1所述的雷帕霉素的纯化方法，其特征在于，所述用第三有机溶剂循环洗脱所述第二中间产物，浓缩洗脱液，得到浓缩液步骤包括：用第三有机溶剂对所述第二中间产物解吸附循环洗涤3-5次，每次1-2小时，重复解吸附步骤2-5次，将洗脱液合并后，浓缩洗脱液，得到浓缩液。2CN111995631A说明书1/7页一种雷帕霉素的纯化方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种雷帕霉素的纯化方法。背景技术[0002]雷帕霉素(Rapamycin，RPM)又称西罗莫司(Sirolimus)，是一种新型大环内酯类强效免疫抑制剂，1999年美国FDA批准作为新型临床抗肾移植排斥反应药物，2001年获欧洲药物管理局(EMA)批准上市，2010年中国食品药品监督管理局(CFDA)批准上市。雷帕霉素相比目前临床使用的免疫抑制药物环孢素A和他克莫司(FK506)，具有口服剂量更小(每次仅需2～3mg)、抗排异作用更强，且副作用更少的优势，是目前市售最好的免疫抑制剂。另外，《Cell》、《Blood》、《Gut》等权威杂志研究表明雷帕霉素还具有治疗糖尿病、肥胖症、帕金森、胰腺癌等疑难杂症的新潜能，预示了雷帕霉素未来的应用前景十分广阔。[0003]雷帕霉素主要通过吸水链霉菌或游动链霉菌微生物发酵法生产，目前发酵水平还比较低，大都小于1g/L。而且雷帕霉素亲脂性,易溶于甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷和氯仿等有机溶剂，极微溶于水，给雷帕霉素下游提取纯化带